LAPORAN MIKROBIOLOGI DASAR

LAPORAN PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI DASAR

DISUSUN SEBAGAI SYARAT

UJIAN AKHIR PRAKTIKUM

Oleh :

NGUDI RAHAYU                             NIM. 0910850081

ROBBY UMMATANA                      NIM. 105080500111007

            BAWONO SUGONDO AJI             NIM. 105080501111003

            ARIF DASTAMAN                           NIM. 105080501111008

            NOVIAN DWI CAHYA                     NIM. 105080501111006

            DWIYANA SAPUTRA                     NIM. 105080501111002

            AHMAD RIZKY AKBAR                 NIM. 105080507111007

            WIDYA SYIAMASHITHOH             NIM. 105080500111010

            WIDYA PUTRA GARAHA              NIM. 105080501111041

ASISTEN

ALIF KHOLIFATUL  J                        NIM. 0810830041

          BUDIDAYA PERAIRAN

FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN

UNIVERSITAS BRAWIJAYA

MALANG

2010

LEMBAR PENGESAHAN

Asisten Praktikum

Mikrobiologi Dasar

(Bondan Arumsari) NIM. 0610830026	(Aunus Shabur) NIM. 0610830009	(Haris Murfi)  NIM. 0610830048
(Risa Riskyani) NIM. 0710830034	(Bastian) NIM. 0710830021	(Rahma T.N.E.A.) NIM. 0710830019
(Heni Susanti) NIM. 0810830012	(Annisa Mursalina) NIM. 0810830044	(Dziki Farih M.) NIM. 0910850013
(Stevanus Ade A.) NIM. 0710830010	(Alif Kholifatul J.) NIM. 0810830041	(Nur Hasanah) NIM. 0910850029

     Malang,

    Menyetujui

                                                                                        Koordinator Asisten

     Febri Tri Vonistara

     NIM. 0710830042

LEMBAR PERSEMBAHAN

Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala rahmat, karunia  dan hidayah-Nya  sehingga kami dapat menyelesaikan tugas mikrobiologi dasar, untuk syarat Ujian Akhir Praktikum Mikrobiologi Dasar, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan.

            Dengan rasa Hormat dan bangga, Kami mempersembahkan Laporan Mikrobiologi Dasar ini Kepada :

1.    Bapak dan Ibu dosen mata kuliah Mikrobiologi Dasar yang telah membimbing kami dengan pemberian materi di dalam kelas.

2.    Asisten – asisten dosen praktikum Biologi dasar yang telah membimbing kami dalam praktikum di Laboratorium dan dalam pembuatan laporan-laporan.

3.    Rekan-rekan kelompok yang telah bekerja sama dalam penyelesaian makalah ini.

4.    Kepada Orang tua kami yang selalu memberikan motivasi, dukungan dan semangat dalam penyusunan laporan ini.

5.    Serta semua pihak yang telah membantu menyiapkan, memberikan masukan dan menyusun makalah ini.

            Terima kasih kami ucapkan kepada segenap orang-orang yang telah kami sebutkan diatas. Laporan ini mungkin tidak akan berhasil dibuat jika tanpa adanya dukungan-dukungan tersebut. Jika kami masih ada banyak kesalahan ataupun mengecewakan kami mohon maaf karena ini termasuk proses pembelajaran untuk kami.

Malang, 9 Desember 2010

Penulis

KATA PENGANTAR

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Allah SWT. Karena atas rahmat dan karunia-Nya, kami dapat menyelesaikan tugas pembuatan laporan Mikrobiologi dasar ini dengan sebaik mungkin.

Laporan ini kami susun untuk melengkapi tugas terstruktur hasil praktikum Mikrobiologi dasar. dan terima kasih kami ucapkan kepada

1.      Bapak Eddy Suprayitno selaku Dekan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan.

2.      Dr. Ir. H. Murachman, Msi selaku Dosen pengasuh mata kuliah Mikrobiologi Dasar.

3.      Orang tua kami yang telah mendukung sepenuhnya dalam penyelesaian pembuatan  laporan ini.

4.      Dan terima kasih buat teman-teman yang telah membantu menyelesaikan laporan ini.

Demikian laporan ini kami persembahkan, semoga dapat digunakan sebagai bahan referensi maupun sebagai penambah pengetahuan bagi pembaca. Kami juga mengharapkan saran dan kritik yang membangun sehingga dapat menambah pemahaman kami dalam pembuatan laporan selanjutnya. Dan semoga laporan ini dapat bermanfaat bagi para pembaca.

Malang, 11 Desember 2010

                                                                                                   Penulis

DAFTAR ISI

                                                                                                                   Halaman

LEMBAR PENGESAHAN.....................................................................        i

LEMBAR PERSEMBAHAN..................................................................        ii

KATA PENGANTAR.............................................................................        iii

DAFTAR ISI...........................................................................................        iv        

I. PENGENALAN ALAT DAN STERILISASI

1. PENDAHULUAN

1.1 Maksud dan Tujuan.................................................................        1

2. METODOLOGI

2.1 Alat dan Fungsi........................................................................        2  

2.2 Bahan dan Fungsi....................................................................        4

2.3 Skema Kerja............................................................................        4

3. TINJAUAN PUSTAKA

3.1 Pengertian dan Tujuan Sterilisasi............................................        7  

3.2 Macam Sterilisasi beserta Kelebihan dan Kekurangan...........        7

3.3 Kelebihan dan Kekurangan Produk Sterilisasi........................        8

4. PEMBAHASAN

4.1 Analisa Prosedur......................................................................        9

4.2 Analisa Hasil............................................................................        10

5. KESIMPULAN....................................................................................        18

DAFTAR PUSTAKA...............................................................................        19

II. PEMBUATAN MEDIA, PENGENCERAN DAN PENANAMAN

1. PENDAHULUAN

1.1 Maksud dan Tujuan.................................................................        20

2. METODOLOGI

2.1 Alat dan Fungsi........................................................................       21         

2.2 Bahan dan Fungsi....................................................................        21

         2.3 Skema Kerja...........................................................................         22

3. TINJAUAN PUSTAKA

3.1 Pengertian dan Fungsi Media..................................................        27

3.2 Jelaskan Macam-Macam Media............................................        27

3.3 Jelaskan NA, PDA beserta Komposisinya..............................        28

3.4 Pengertian dan Tujuan Pengenceran......................................        28

3.5 Macam Metode Penanaman beserta Kelebihan dan

      Kekurangannya.......................................................................        29

4. PEMBAHASAN

4.1 Analisa Prosedur......................................................................        30

4.2 Analisa Hasil............................................................................        33

5. KESIMPULAN....................................................................................        36

DAFTAR PUSTAKA...............................................................................        37

III. PERHITUNGAN KOLONI BAKTERI

1. PENDAHULUAN

1.1 Maksud dan Tujuan.................................................................        38

2. METODOLOGI

2.1 Alat dan Fungsi........................................................................        39

2.2 Bahan dan Fungsi....................................................................        39

3.3 Skema Kerja............................................................................        39

3. TINJAUAN PUSTAKA

3.1 Pengertian Pertumbuhan Bakteri ...........................................        40

3.2 Fase-Fase Pertumbuhan Bakteri dan Kurva Pertumbuhan....        40

3.3 Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Pertumbuhan Bakteri.....        41

3.4 Macam Metode Perhitungan Koloni .......................................        41

4. PEMBAHASAN

4.1 Analisa Prosedur......................................................................        43

4.2 Analisa Hasil............................................................................        43

5. KESIMPULAN....................................................................................        52

DAFTAR PUSTAKA...............................................................................        53 

IV. IDENTIFIKASI JAMUR

1. PENDAHULUAN

1.1 Maksud dan Tujuan.................................................................        54

2. METODOLOGI

2.1 Alat dan Fungsi........................................................................        56

2.2 Bahan dan Fungsi....................................................................        56

2.3 Skema Kerja............................................................................        57

3. TINJAUAN PUSTAKA

3.1 Pengertian Jamur....................................................................        58

3.2 Jelaskan Macam-Macam Klasifikasi Jamur...........................        59

3.3 Macam-Macam Metode Penanaman Jamur beserta

      Kelebihan dan  Kekurangannya..............................................        59

4. PEMBAHASAN

4.1 Analisa Prosedur......................................................................        60

4.2 Analisa Hasil............................................................................        61

5. KESIMPULAN....................................................................................        63

DAFTAR PUSTAKA...............................................................................        64 

V. PERHITUNGAN TOTAL VIBRIO

1. PENDAHULUAN

1.1 Maksud dan Tujuan.................................................................        65

2. METODOLOGI

2.1  Alat dan Fungsi.......................................................................        66

2.2. Bahan dan Fungsi...................................................................        66

2.3 Skema Kerja............................................................................        67

3. TINJAUAN PUSTAKA

3.1 Pengertian Bakteri Vibrio.........................................................        69

3.2 Jenis-Jenis dan Komposisi Media Untuk Pertumbuhan

      Bakteri Vibrio...........................................................................        69

3.3 Macam-macam Bakteri Vibrio beserta Penjelasannya .........        69

3.4 Habitat Bakteri vibrio dan Mekanisme Penularan

      Penyakit yang Disebabkan Bakteri Vibrio........................        70

4. PEMBAHASAN 

4.1 Analisa Prosedur......................................................................        71

4.2 Analisa Hasil............................................................................        73

5. KESIMPULAN....................................................................................        75

DAFTAR PUSTAKA...............................................................................        76

PRAKTIKAN ZONE................................................................................        77

 

1.    PENDAHULUAN

1.PENDAHULUAN

            Pengenalan alat dan sterilisasi merupakan hal mendasar yang harus kita ketahui dan kuasai karena penting dalam melaksanakan kegiatan-kegiatan mikrobiolgi selanjutnya.Sterilisasi adalah membebaskan bahan dari semua mikroba.Sedangkan sterilisasi komersil ( commercial sterilization ) adalah sterilisasi yang dilakukan terhadap sebagian makanan kaleng atau botol yang bertujuan untuk membunuh bakteri yang merugikan dan tidak diinginkan ( bakteri patogen ).Sterilisasi adalah istilah mutlak yang artinya mematikan semua bentuk kehidupan pada suatu daerah.Sehingga dalam sterilisai nanti alat-alat tidak terkontaminasi dengan pihak luar.

            Sterilisasi terbagi menjadi dua,yaitu:

1.    Sterilisasi basah ,yaitu sterilisasi yang menggunakan autoklaf dengan temperatur 121˚C tekanan 1 atm / 0,15 Mpa selama 15-20 menit.

2.    Sterilisasi kering ,yaitu sterilisasi yang menggunakan oven dengan temperatur 160-170˚C

Selama kurang lebih 2 jam

Sterilisasi ditujukan ditujuan agar terjadi denaturasi protein dan terutama tidak aktifnya enzim yang digunakan untuk metabolisme bakteri,dan perlakuan panas ditujukan untuk membunuh spora bakterinya.Sterlisasi pada medium dan alat-alat bertujuan untuk mencegah adanya bakteri yang tidak diinginkan dalam pemiaraan.

Maksud dan Tujuan

            Maksud dari praktikum ini adalah agar praktikan mengetahui alat-alat yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi dan kegunaannya serta mengetahui tata cara sterilisasi basah.

            Sedangkan tujuan dari praktikum adalah agar praktikan dapat melakukan proses sterilisasi dan memiliki ketrampilan dalam mneggunakan alat-alat di laboratorium mikrobiologi.

2.METODE

2.1  Alat dan Fungsi

Alat-alat yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi :

Alat Besar

·         Autoclave              :           Sterilisasi basah dengan suhu 121˚C / 1 atm dengan

waktu 15-20 menit

·         Mikroskop             :           Melihat benda-benda yang berukuran mikropis

·         Lemari Es              :           Menyimpan sampel pada suhu yang rendah

·         Cooling Inkubator  :           Menginkubasi media pada suhu rendah

·         Kompor                 :           Sebagai sumber panas

·         Panci                     :           Merebus media

·         Vortex Mixer         :           Menghomogenkan larutan

·         Water Bath                        :           menginkubasi media cair dengan suhu yang dapat

ditentukan

·         Inkubator               :           Menginkubasi media padat pada suhu yang dapat

ditetapkan

·         Incase                   :           Menginkubasi sampel pada suhu kamar (24-27˚C)

·         Colloni Counter     :           Menghitung jumlah koloni bakteri

·         Oven                     :           Tempat sterilisasi kering dengan suhu 160-170˚C

·         Timbangan Digital :           Untuk menimbang dengan ketelitian 10^-2

Alat Kecil

·         Washing Bottle      :           Tempat Aquades

·         Sprayer                 :           Tempat alkohol 70%

·         Bunsen                  :           Untuk pengkondisian aseptis dan sumber panas

·         Mortar dan Alu      :           Menghaluskan sampel

·         Erlemenyer 250ml            :           Pembuatan media

·         Pipet Volume        :           Mengambil larutan dalam skala 1-10 ml

·         Pipet Serologis      :           Mengambil larutan dalam skala 0,1-1ml

·         Pipet Tetes                        :           Mengambil larutan dalam skala kecil

·         Cawan Petri                      :           Sebagai tempat media sampel

·         Triangle                 :           Alat untuk melakukan penanaman media sebar

·         Gelas Ukur 100ml :           Untuk mengukur larutan yang dibutuhkan

·         Beaker Glass        :           Sebagai tempat media biakan

·         Tabung Reaksi      :           Sebagai tempat pengenceran bertingkat

·         Jarum Case                      :           Untuk memindahkan koloni dari medium padat-cair

·         Jarum Loop                       :           Untuk memindahkan koloni dari medium padat-cair

·         Crustable Tooch   :           Untuk mengambil benda yang panas

·         Objek Glass                      :           Tempat objek yang akan diamati

·         Cover Glass                      :           Sebagai penutup objek yang akan diamati pada

mikroskop

·         Rak Tabung                      :           Sebagai tempat tabung reaksi

2.2  Bahan dan Fungsi

Bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum Mikrobiologi Dasar tentang pengendalian alat dan sterilisasi buatan adalah:

·         PDA                      :           Penanaman media jamur

·         NaFis                     :           Sebagai larutan indikator

·         Alkohol 70%          :           Sebagai peroksida aseptis

·         Kertas Label          :           Untuk memberi tanda tabung reaksi

·         Koran                    :           Untuk membungkus alat yang akan disterilisasi

·         Tali                                    :           Untuk mengikat koran

·         Kapas                    :           Menyumbat pangkal pipet yang akan disterilisasi

·         Air                          :           Untuk membersihkan alat setelah praktikum

·         Tissue                    :           Membersihkan alat setelah praktikum

2.3  Skema Kerja

·         Alat dicuci lalu dikeringkan

·         Alat yang telah kering ditutup dengan menggunakan kapas(pipet serologis)

·         Dibungkus dengan kertas koran dan diikat

·         Dimasukkan Autoclave untuk disterilisasi

·         Bila air dalam Autoclave kurang,maka tambah dengan air sampai menutupi elemen pemanas

·         Autoclave ditutup dan dirapatkan

·         Dinyalakan kompor dan tutup dirapatkan hingga suhu naik menjadi 121˚C(249,8˚F) tekanan 1 atm (o,15 Mpa)

·         Ditunggu selama 15-20menit

·         Dimatikan kompor dan tunggu sampai tekanan 0 Mpa

·         Dibuka tutup Autoclave dan dikeluarkan alat-alat

·         Di dinginkan

·         Hasil

·         Pengemasan

Pipet Serologis

§  Dicuci

§  Diangin-anginkan atau dikeringkan

§  Ditutup kapas pada pangkal pipet

§  Diikat dengan tali

§  Disterilisasi basah dalam Autoclave dengan suhu 121˚C tekanan 1 atm / 0,15 Mpa selama 15-20 menit

Hasil

                       

                       

Cawan Petri

·         Dicuci

·         Diangin-anginkan atau dikeringkan

·         Ditutup kapas pada pangkal pipet

·         Diikat dengan tali

·         Disterilisasi basah dalam Autoclave dengan suhu 121˚C tekanan 1 atm / 0,15 Mpa selama 15-20 menit

Hasil

·         Sterilisasi

Autoclave Manual

·         Diisi dengan air

·         Dimasukkan alat-alat yang akan disterilisasi kedalam keranjang

·         Ditutup dan dikunci

·         Diatur suhu 121˚C tekanan 1 atm / 0,15 Mpa

·         Ditunggu selama 15-20 menit

·         Dimatikan kompor dan dibuka ketel uap

·         Ditunggu tekanan sampai 0 Mpa

·         Dibuka tutup

·         Dikeluarkan alat

·         Di dinginkan

Hasil

3.TINJAUAN PUSTAKA

3.1 Pengertian dan tujuan Sterilisasi

            Menurut Pratiwi (2010),sterilisasi dalam mikrobiologi meruapakan proses penghilangan semua jenis organisme hidup.Dalam hal ini adalah mikroorganisme yang terdapat pada suatu benda.

            Menurut Rianto (2010) tujuan utama yaitu mematikan,menyingkirkan atau mengahmbat pertumbuhan mikroorganisme adalah :

1.    Untuk mencegah inflasi pada manusia , hewan dan tumbuhan

2.    Untuk mencegah makanan dan lain-lain menjadi rusak

3.    Untuk mencegah gangguan kontaminasi terhadap mikroorganisme

4.    Untuk mencegah kontaminasi bahan-bahan yang dipakai

Sterilisasi adalah setiap proses kimia , fisika dan mekanik yang membunuh semua bentuk kehidupan , terutama mikroorganisme ( waluyo,2004).

Sterilisasi adalah metode praktis yang dirancang untuk membersihkan dari mikroorganisme , atau sengaja untuk menghambat pertumbuhannya yang nyata dari kepentingan dasar di banyak keadaan (burdon,1969 dalam junaidi , 2009).

Sterilisasi adalah suatu proses untuk membunuh semua jenis pada alat dan bahan yang digunakan pada pengujian mikrobiologi dan bakteri / virus dari lingkungan sekitar (dwitia ,2009).

3.2 Macam Sterilisasi beserta Kelebihan dan Kekurangan

            Menurut Irwanti (2010) sterilisasi dapat dilakukan dengan 3 cara :

1.    Sterilisasi pemanasan basah dengan menggunakan uap atau air panas.

2.    Sterilisasi kering dengan menggunakan tanur.

3.    Pembakaran total.

Panas dalam bentuk bentuk uap jenuh bertekanan adalah sarana paling praktis serta dapat diandalkan untuk sterilisasi.Uap bertekanan menyediakan suhu jenuh diatas titik didih.Disamping itu juga mempunyai keuntungan seperti pemanasan dapat berlangsung cepat mempunyai daya tembus dan menghasilkan kelembapan yang tinggi (pelczar dan chan , 2008).

Sterilisasi panas kering berfungsi untuk mematikan organisme dengan cara mengoksidasi komponen sel ataupun mendenaturasi enzim (pratiwi,2008).

Kelebihan dan kekurangan dari metode-metode sterilisasi yaitu sebagai berikut :

1.    Sterilisasi dengan feltrasi :

·         Kecepatan pada penyaringan sejumlah larutan

·         Efektif untuk menghasilkan materi-materi yang tidak panas

·         Peralatan yang digunakan murah

·         Penggunaan penyaring terbantu mempunyai kecenderungan mengabsorsi beberapa senyawa aktif tertentu

·         Kesterilan hasil yang diperoleh tidak pasti

·         Tidak dapat menyaring virus

·         Hanya sekali pakai

2.    Sterilisasi panas lembab :

·         Waktu yang diperlukan sedikit

·         Dapat digunakan untuk sterilisasi hampir semua alat

·         Sangat bergantung pada adanya kelembapan dan temperatur

·         Uap air yang menetes dapat merusak media-media tertentu.

4.  PEMBAHASAN

4. 1 Analisa Prosedur.

1.    Penyesuaian dan fungsi tiap perlakuan.

pertama disiapkan alat terlebih dahulu yang akan dibungkus. Kemudian alat dicuci terlebih dahulu lalu dikeringkan agar bersih. Untuk ala yang sudah kering ditutup menggunakan kapas (pipet serelogis) agar alat tidak kemasukan air. Setelah itu, alat dibungkus dengan Koran yang rapi agar proses penyerapan air pada saat sterilisasi merata. Kemudian diikat dengan tali agar proses pembungkusanya sempurna.

2.    Sterilisasi dan fungsi tiap perlakuan.

Pertama siapkan alat yang sudah dikemas dan masukkan kedalam autoclave untuk disterilisasi. Bila air dalam autoclaf kurang, maka ditambah dengan air sampai menutupi element pemanas agar suhu dan tekanan dalam autoclave tetap. Setelah itu autoclaf ditutup dengan posisi diagonal agar penutupan lebih kuat dan kemudian dirapatkan lalu kompor dinyalakan  hingga suhu autoclaf naik menjadi 121 °C dengan tekanan  1 atm, Karena ini merupakan sterilisasi basah. Kemudian ditunggu hingga 15 – 20 menit, setelah itu kompor dimatikan dan ditunggu hingga tekanan 0 atm. Kemudian tutup autoclaf dibuka dan dikeluarkan alat – alat dan didinginkan.

3.    Pengenceran dan fungsi tiap perlakuan.

Pertama disisapkan alat berupa pipet serelogis dan cawan petri terlebih dahulu. Pipet serelogis berfungsi untuk mengambil larutan sebanyak 0,1 – 1 ml sedangkan cawan petri berfungsi untuk penanaman. Kemudian pipet serelogis dicuci terlebih dahulu agar bersih, Setelah itu dikeringkan agar kering. Kemudian cawan petri dan pipet serologis dibungkus Koran agar airnya pada saat sterilisasi tersera. Adapun pembungkusan cawan petri dan pipet serelogis sebagai berikut :

            a). Pipet serelogis.

Disiapkan terlebih dahulu Koran yang untuk membungkus pipet serelogis. Kemudian Koran dilipat bagian ujungnya sebagai tanda untuk meletakkan bagian ujung pipet serelogis. Setelah itu, pipet serelogis dimasukkan pada Koran yang sudah dilipat tadi. Kemudian bagian samping dilipat kedalam kedua sisisnya dan bagian atasnya. Setelah itu diikat dengan tali agar lebih rapat.

 b). cawan petri.

            Disiapkan terlebih dahulu koran untuk membungkus cawan petri kemudian cawan petri diletakkan diatas Koran dengan posisi miring agar proses pembungkusan lebih sempurna. Setelah diguling pelan – pelan sambil dilipat kedalam Koran kedua sisinya sampai Korannya habis agar proses pembungkusan lebih sempurna, kemudian diikat dengan tali agar lebih rapat.

4. 2 Analisa Hasil.

            Dari  praktikum pengenalan alat diperoleh data sebagai berikut :

Ø  Alat Besar

No	Nama Alat	Gambar	Fungsi
1.	Kulkas		Tempat menyimpan sampel dan media isolasi pada suhu rendah dingin
2.	Autoclaf		Untuk sterilisasi basah pada suhu 121 °C dengan tekanan 1 atm selama 15 – 20 menit
3.	Kompor gas		Sebagai sumber panas untuk autoclaf
4.	Water Bath		Tempat menyimpan media cair pada suhu yang bias ditentukan
5.	Oven		Untuk Sterilisasi kering pada suhu 160 – 170 °C
6.	Microskop		Untuk mengamati benda – benda berukuran microscopik
7.	Cooling Incubator		Mengikubasi pada media padat pada suhu dingin ± 20 °C
8.	Hot plate		Untuk memanaskan media
9.	Timbangan digital		Untuk menimbang dengan ketelitian 10-2
10.	incubator		Menginkubasi pada suhu yang ditentukan
11.	Coloni counter		Untuk menghitung jumlah microba
12.	Panci		Tempat untuk merebus media
13.	Vortex mixer		Membantu untuk menghomogenkan sampel
13.	incase		Menginkubasi pada suhu kamar pada suhu 25 – 27 °C

Ø  Alat Kecil

No	Nama Alat	gambar	fungsi
1.	Gelas ukur 100 ml		Untuk menguku aquades
2.	Beaker glass		Tempat pembuatan Na fis 0,9 %
3.	erlenmayer		Tempat pembuatan PCA dan NA
4.	Tabung reaksi		Tempat pengencereran bertingkat
5.	Rak tabung reaksi		Menyimpan / sebagai tempat menaruh tabung reaksi
6.	Jarum loop		Menginduksi microba dari media padat ke cair begitu juga sebaliknya
7.	Jarum ose		Menginduksi microba dari media padat ke padat
8.	Cawan petri		Sebagai tempat media bakteri
9.	Pipet tetes		Mengambil larutan dengan ukuran tetes
10.	Objek glass		Tempat sampel pada microskop
11.	Spatula		Menghomogenkan larutan secara manual
12.	Pipet serelogis 1 ml		Mengambil larutan sebanyak 0,1 ml – 1 ml
13.	Pipet volum 10 ml		Untuk mengambil larutan sebanyak 1 ml – 10 ml
14.	Washing botle		Tempat wadah aquades
15.	Triangle		Meratakan sampel pada penanaman pada metode tebar
16.	Bunsen		Penginduksi aseptic
17	Cruscable tang		Untuk  mengambil barang yang masih panas
18.	Cover glass		Menutup sample pada objek glass
19.	sprayer		Tempat alcohol 70 %

5. KESIMPULAN

ü  Sterilisasi adalah mematikan semua bentuk kehidupan pada suatu media dengan tujuan membebaskan bahan dari semua jenis microorganisme agar dapat ditanam microorganime yang diinginkan.

ü  Peralatan yang digunakan harus benar – benar steril agar tidak terdapat microorganisme yang dapat tumbuh pada media yang digunakan untuk penanaman.

ü  Sterilisasi dibagi menjadi 2 yaitu sterilisasi basah dengan suhu 121 °C pada tekanan 1 atm selama 15 – 20 menit didalam autoclaf, dan sterilisasi kering dengan suhu 160 – 170 °C selama 2 jam.

ü  Alat – alat yang telah dikeluarkan dari autoclaf dalam keadaan steril dan kertas Koran digunakan untuk membungkus alat – alat tersebut dalam keadaan basah dan kaku karena banyak menyerap uap air.

ü  Alat berupa pipet serelogis dan cawan petri menjadi steril dan bebas dari microba, sehingga bakteri microba tidak terdapat lagi pada alat – alat tersebut.

DAFTAR PUSTAKA

J. Pelczar, 1986. Mikrobiologi fourt edition, New York, Me Graw Hill Book Company. Dikutip pada hari jumat, 5 November 2010 pukul 15.40 wib

Nur Muhammad, 2006. Mikrobiologi umum. THP Universitas Brawijaya. Gramedia. Dikutip pada hari kamis, 4 November 2010 pukul 10.20 wib

Schelegal,1994. Mikrobiologi umum edisi ke enam. FMIPA ITB Bandung. UGM Press. Dikutip pada hari kamis, 4 November 2010 pukul 18.05 wib

Waluyo, 2008. Teknik metode dasar mikrobiologia. Jakarta. Umum press. Dikutip pada hari senin, 1 November 2010 pukul 08.50 wib

Zubaidah, Elok. 2006. Diktat kuliah mikrobiologi umum. THP Universitas Brawijaya. Gramedia press. Dikutip pada hari rabu, 3 November 2010 pukul 09.45 wib

1.PENDAHULUAN

 Media adalah suatu substrat dimana mikroorganisme dapat tumbuh yang disesuaikan dengan lingkungan hidupnya. Media kultur berasarkan konsistensinya dibedakan atas tiga macam, yaitu media cair, media semi padat, dan media padat.

Total Plate Count (TPC) merupakan salah satu metode yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam bahan pangan. Metode hitungan cawan (TPC) merupakan metode yang paling banyak digunakan dalam analisa, karena koloni dapat dilihat langsung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop. Untuk menghitung total bakteri dengan metode cawan digunakan Nutrient Agar  (NA).

Tahap –tahap utama dalam analisa TPC meliputi pembuatan media, pengenceran dan penanaman bakteri. Dalam pembuatan media ini, media biakan diperlukan untuk tumbuhnya bakteri yang ditanam. Sehingga media biakan yang baik harus dapat menyediakan nutrisi, tempat inkubasi, dan terpenuhinya kebutuhan oksigen yang diperlukan oleh mikroba.

Pengenceran biasanya menggunakan larutan berupa larutan fosfat buffer, larutan garam fisiologis 0,9 % atau larutan ringer. Dengan pengenceran dapat mengurangi kepadatan bakteri yang ditanam. Secara umum, metode penanaman dapat dibedakan atas dua macam yaitu metode tuang (pour plate) dan metode sebar (spread plate).

Maksud dan Tujuan

Maksud dari praktikum ini adalah agar praktikan Mikrobiologi Dasar dapat mengetahui dan memahami cara pembuatan media, pengenceran, dan penanaman bakteri.

Tujuan dari praktikum ini adalah agar praktikan terampil dalam melakukan pembuatan media, pengenceran dan penanaman bakteri.

2. METODOLOGI

2.1  Alat

Adapun alat – alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

·         Kompor           : Sumber panas autoklaf.

·         Panci               : Merebus media dan alat yang digunakan.

·         Timbangan      : Menimbang media..

·         Tabung reaksi : Pengenceran bertingkat.

·         Autoklaf           : Sterilisasi basah.

·         Cawan petri     : Tempat atau media penanaman.

·         Erlenmeyer     : Tempat larutan sementara saat sterilisasi.

·         Rak tabung reaksi: Tempat tabung reaksi.

·         Bunsen            : Pengkondisian aseptis.

·         Gelas ukur      : Menakar larutan sejumlah 50, 100, 250 ml.

·         Pipet volume   : Mengambul larutan (1 – 10 ml).

·         Pipet serologis: Mengambil larutan dengan skala 0,1 -1 ml.

·         Incase             : Inkubasi suhu kamar (24⁰C – 27⁰C).

·         Timbangan Digital : Meninmbang media dengan ketelitian 10^-2.

2.2  Bahan

Adapun bahan – bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

·         Daging 0,5 kg  : Sebagai bahan media kaldu.

·         Air destilata 1000 ml : Merendam daging 0,5 kg.

·         Kain saring      : Untuk menyaring media kaldu.

·         Pepton 5 gr     : Sebagai bahan media.

·         Agar 5 gr         : Sebagai bahan media.

·         PDA                : Sebagai bahan media PDA.

·         NA                   : Sebagai bahan media NA.

·         Aquades          : Sebagai pelarut dalam pembuatan media.

·         Sampel            : Sebagai sumber yang diamati.

2.3  Cara Kerja

Pembuatan media kaldu

Daging 0,5 kg

-        Dicuci

-        Dibuang lemak

-        Dipotong kecil – kecil

-        Diberi aquades 1000 ml

-        Disimpan semalam dalam kulkas

-        Disaring

-        Ditambah aquades  sampai 1000 ml

-        Ditambah pepton 5 gram

-        Ditambah agar 7,5 gram

-        Direbus dalam panci ± 20 menit

-        Disterilisasi

-        Didinginkan

-        Diamati

Hasil

Pembuatan media PDA

PDA

-        Ditimbang sebanyak 0,78 gram

-        Dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 ml

-        Ditambah aquades 20 ml

-        Dihomogenkan

-        Ditutup kapas

-        Dibungkus koran

-        Diikat dengan tali

-        Direbus dalam panci

-        Disterilisasi dalam autoklaf

-        PDA steril

Hasil

Perhitungan PDA

PDA    ₌     39  X ∑ml cawan yang yang dipakai

                1000

            ₌     39  X 20 ml ₌ 0,78 gram PDA

               1000

Pembuatan media NA

NA

-        Ditimbang sebanyak 3,36 gram

-        Dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 ml

-        Ditambah aquades 120 ml

-        Dihomogenkan

-        Ditutup kapas

-        Dibungkus koran

-        Diikat dengan tali

-        Direbus dalam panci

-        Disterilisasi dalam autoklaf

-        NA steril

Hasil

Perhitungan NA

NA       ₌    28   X ∑ml cawan yang yang dipakai X ∑cawan yang dipakai

                1000

            ₌    28   X 20 X 6 ₌ 3,36 gram NA

                1000

Pembuatan NaFis 0,9 %

NaCl

-        Ditimbang NaCl sebanyak 0,9 gram

-        Diukur aquades sebanyak 100 ml

-        Dihomogenkan

-        Diambil dan dimasukkan ke dalam 10 tabung reaksi (@ 9 ml)

-         Ditutup tabung reaksi dengan kapas

-        Dibungkus koran

-        Diikat dengan tali

-        Disterilisasi

Hasil

Perhitungan NaFis 0,9 %

Gram NaCl ₌     0,9     X ∑ml yang yang dipakai X ∑tabung reaksi

                        100

                   ₌    0,9       X 10 X 10 ₌ 0,9 gram NaCl

            100

Pengenceran

Sampel

-        Diambil tanah

-        Dihaluskan

-        Ditimbang sebanyak 1 gram

-        Diambil dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi

-        Dicatat sebagai 10-1

-        Dihomogenkan

Tabung Reaksi I

-        Diambil sebanyak 1 ml

-        Dimasukkan ke dalam tabung reaksi II

-        Dihomogenkan

-        Dicatat sebagai 10-2

Tabung Reaksi II

-        Diambil sebanyak 1 ml

-        Dimasukkan ke dalam tabung reaksi III

-        Dihomogenkan

-        Dicatat sebagai 10-3 dan seterusnya sampai tabung reaksi V

Tabung Reaksi III, IV, V

-        Diambil sebanyak 1 ml dari masing – masing tabung reaksi

-        Dimasukkan ke dalam cawan petri

-        Dilakukan secara duplo

-        Didekatkan bunsen

Hasil

3. TINJAUAN PUSTAKA

3.1  Pengertian dan Fungsi Media

Dasar makanan yang paling baik bagi pemiaraan baakteri ialah medium yang mengandung zat – zat organik seperti rebusan daging, sayur – sayuran, sisa – sisa makanan atau ramuan – ramuan yang dibuat oleh manusia. Medium yang banyak digunakan dalam pekerjaan rutin di laboratorium ialah kaldu cair dan kaldu agar. Medium ini tersusun daripada : kaldu bubuk 3 gram, pepton 5 gram, air suling 1000 gram (Dwidjoseputro, 2005).

Media adalah suatu substrat untuk menumbuhkan bakteri yang menjadi padat dan tetap tembus pandang pada suhu inkubasi (Pelczar et al, 1986).

Medium adalah suatu bahan nutrisi tempat menubuhkan bakteri di laboratorium (Tortora, 2007).

3.2  Jelaskan Macam – Macam Media

Menurut Dwidjoseputro (1964), media dibedakan menjadi :

·         Media cair misalnya kaldu.

·         Media kental (padat) menggunakan kentang yang dipotong.

·         Media yang diperkaya.

·         Media yang sintetik berupa ramu –ramuan zat anorganik.

·         Media kering berupa serbuk kering yang dilarutkan dalam air.

Menurut Pelczar et al (1986), media dibedakan menjadi:

·         Media yang diperkaya komponennya yaitu lumpur, ekstra serum dari tanaman atau hewan.

·         Media selektif yaitu bagian kimiawi secara spesifik untuk NA agar dapat tumbuh bakteri  tanpa adanya halangan dari apapun.

·         Media yang berbeda yaitu menyatukan reagen atau zat kimia di media untuk menghasilkan pertumbuhan yang baik setelah diinkubasi dan diinokulasi dengan mengizinkan 2 pertumbuhan bakteri yang berbeda.

Menurut Hadioetomo (2010), media  dibedakan menjadi 2 menurut komposisi kimiawinya yaitu mediu sintetik dan medium nonsintetik atau kompleks. Medium sintetik dibuat dari bahan kimia yang kemurnian tinggi dan ditentukan dengan tepat, sedangkan medium non-sintetik tidak diketahui dengan pasti.

3.3  Jelaskan NA, PDA beserta komposisinya

Menurut Pelczar et al (1986), NA (Nutrient Agar) adalah padatan yang bermaksud membuat media menjadi padat.

Komposisi NA :

-        Ekstra Daging Sapi        3 gram.

-        Pepton                           5 gram

-        Agar                               15 gram

-        Air                                  1000 ml.

Menurut Fathir (2009), Komposisi PDA

-        20% Extra daging sapi

-        2% Glukosa

NA (Nutrient Agar) digunakan untuk budidaya bakteri dan untuk pencegahan organisme dalam air, limbah, kotoran, dan lainnya. Komposisi : Beef extract, peptone, agar dan aquadest (Ruly, 2009).

3.4  Pengertian dan Tujuan Pengenceran

Pengenceran adalah melarutkan atau melepasan mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. Tujuan pengenceran yaitu untuk mengurangi kepadatan kepadatan bakteri yang ditanam (Fais, 2009).

Pengeenceran merupakan proses yang dilakukan untuk menurunkan atau memperkecil konsentrasi larutan dengan menambah zat pelarut ke dalam larutan sehingga volume larutan menjadi berubah (Nurohaianah et al, 2007).

3.5  Macam Metode Penanaman beserta Kelebihan dan Kekurangannya

Menurut Fais (2009), metode penanaman ada dua yaitu :

Dari deskripsi yang singkat ini mengenai ciri – ciri nutrisi bakteri haruslah dikenal dua langkah penting bagi intensitasnya. Di laboratorium (1) inokulasi penanaman penting bagi suatu medium dengan kandungan nutrisi yang sesuai (2) inkubasi medium yang sudah diinokulasi pada keadaan fisik (Waluyo, 2005).

4. PEMBAHASAN

4.1 Analisa Prosedur

4.1.1 Rumus Serta Perhitungan NA,PDA dan NaFis

Adapun rumus serta perhitungan NA adalah  dimana angka 28 merupakan komposisi NA, jumlah cawan yang digunakan adalah 6 cawan, 20 ml adalah banyaknya aquades yang ditambahkan dan 1000 adalah koefisien yang menyatakan volume 1 liter aquades, jadi perhitungannya adalah . Jadi, banyak NA yang digunakan sebanyak 3,36 gram. Kemudian rumus perhitungan PDA adalah . Angka 39 merupakan komposisi PDA, angka 1000 adalah koefisien yang menyatakan volume 1 liter aquades. Jumlah cawan yang dipakai hanya 1 cawan, 20 ml adalah banyaknya aquades yang ditambahkan. Perhitungannya adalah sebagai berikut  gram. Maka banyak PDA yang dibutuhkan adalah 0,78 gram. Rumus perhitungan NaFis adalah gram . Angka 0,9 adalah konsentrasi yang dibutuhkan yaitu 0,9 . Jumlah  tabung reaksi yang digunakan adalah 10 tabung reaksi, 10 ml adalah banyak aquadest yang ditambahkan, jadi perhitungannya adalah Gram . Maka NaCl yang dibutuhkan adalah 0,9 gram.

4.1.2 Prosedur Pembuatan Media dan NaFis

Prosedur pembuatan media kaldu, Media NA, media PDA dan pembuatan NaFis diawali dengan disiapkan alat dan bahan. Alat yang digunakan antara lain kompor sebagai sumber panas, panic untuk merebus Erlenmeyer, timbangan, tabung reaksi, autoklaf, cawan petri, Erlenmeyer, rak tabung reaksi, Bunsen, gelas ukur, pipet volum, pipet serologis, dan incase. Bahan – bahan yang digunakan antara lain media kaldu dari daging 0,5 kg, air destilata 1000 ml, kain saring. Pepton 5 gram, agar 5 gram, PDA, NA, aquades, sampel tali, kapas, Koran.

Pada pembuatan media NA, bahan yang digunakan adalah 3,36 gram NA yang ditimbang dengan timbangan digital ketelitian , perhitungan 3,36 didapat dari rumus . NA dimasukkan dalam Erlenmeyer 250 ml dan ditambah aquadest sebesar 20 ml yang telah diukur dengan gelas ukur. NA dan aquadest dihomogenkan dengan cara digoyang, kemudian mulut Erlenmeyer ditutup  bungkus korang agar Koran menyerap uap air, kemudian Koran diikat dengan tali agar rapat, lalu Erlenmeyer direbus 15 – 20 menit di dalam panci agar homogen setelah itu dimasukkan ke dalam autoklaf untuk sterilisasi basah. NA yang sudah steril disimpan dalam waterbath sampai digunakan kembali.

Pada pembuatan media PDA, bahan yang digunakan adalah 0,78 gram PDA yang ditimbang dengan timbangan digital ketelitian , perhitungan 0,78 didapat dari rumus . NA dimasukkan dalam Erlenmeyer 250 ml dan ditambah aquadest sebesar 20 ml yang telah diukur dengan gelas ukur. PDA dan aquadest dihomogenkan dengan cara digoyang, kemudian mulut Erlenmeyer ditutup  bungkus korang agar Koran menyerap uap air, kemudian Koran diikat dengan tali agar rapat, lalu Erlenmeyer direbus 15 – 20 menit di dalam panci agar homogen setelah itu dimasukkan ke dalam autoklaf untuk sterilisasi basah. PDA yang sudah steril disimpan dalam waterbath sampai digunakan kembali.

Pada pembuatan media NaFis, bahan yang digunakan adalah 0,9 gram NaCl yang ditimbang dengan timbangan digital ketelitian , perhitungan 3,36 didapat dari rumus . NaCl dimasukkan dalam Erlenmeyer 250 ml dan ditambah aquadest sebesar 20 ml yang telah diukur dengan gelas ukur. NaCl dan aquadest dihomogenkan dengan cara digoyang, kemudian mulut Erlenmeyer ditutup  bungkus korang agar Koran menyerap uap air, kemudian Koran diikat dengan tali agar rapat, lalu Erlenmeyer direbus 15 – 20 menit di dalam panci agar homogen setelah itu dimasukkan ke dalam autoklaf untuk sterilisasi basah. NaFis yang sudah steril disimpan dalam waterbath sampai digunakan kembali.

Pada pembuatan media kaldu, disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. Bahan yang digunakan berupa daging sebanyak 0,5 kg yang ditimbang dengan timbangan. Daging dicuci bersih dan dibuang lemaknya kemudian dipotong kecil-kecil menggunakan pisau. Aquadest diukur sebanyak 1000 ml dengan gelas ukur lalu dimasukkan ke dalam beaker glass dan dimasukkan pula potongan daging. Mulut beaker ditutup plastic kemudian diikat agar tidak terkontaminasi. Daging disimpan dalam kulkas selama semalam kemudian dikeluarkan dari kulkas dan disaring menggunakan kertas saring, diambil airnya. Air saringan ditambah aquadest hingga 1000 ml. Kemudian mulut Erlenmeyer ditutup  bungkus korang agar Koran menyerap uap air, kemudian Koran diikat dengan tali agar rapat, lalu Erlenmeyer direbus 15 – 20 menit di dalam panci agar homogen setelah itu dimasukkan ke dalam autoklaf untuk sterilisasi basah. Didapan hasil media kaldu steril.

Pembuatan sampel digunakan bahan yaitu tanah – tanah yang lokasinya sudah ditentukan di Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Tanah dihaluskan dengan mortar dan alu. Ditimbang 1 gram menggunakan timbangan digital ketelitian , kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi, dicatat sebagai  dengan kertas label. Sampel dihomogenkan dengan aquadest menggunakan spatula.

Pada pengenceran, tanah yang menjadi sampel pada tabung diambil 1 ml dengan menggunakan pipet serologis dimasukkan pada tabung reaksi 2 dan dicatat sebagai  menggunakan kertas label. Dari tabung reaksi 2 diambil 1 ml dan dimasukkan dalam tabung reaksi 3 dan dicatat sebagai . Dari tabung 3 diambil 1 ml dan dimsukkan lagi ke tabung reaksi 4 dicatat sebagai . Dari tabung 4 diambil 1 ml dimsukkan pada tabung ke 5. Kelima tabung secara berurutan diletakkan pada rak tabung reaksi, tujuannya yaitu mengurani tingkat kekeruhan sampel dan mengurangi jumlah organisme yang akan diamati.

Pada penanaman, diambil 1ml dari masing – masing sampel dan  dituang pada cawan petri . Perlakuan duplo bertujuan sebagai pembanding. Pada masing – masing cawan petri ditambah media NA hingga sampel tertutup media. Cawan petri digoyang membentuk angka 8 agar homogen. Ke enam cawan ditunggu hingga beku dekat Bunsen untuk pengondisian aseptis. Setelah membeku, cawan dibalik agar tidak ada uap air yang jatuh saat sterilisasi. Cawan petri dibungkus Koran untuk menyerap air. Kemudian diikat dengan tali agar rapat setelah itu di inkubasi selama semalam di dalam incase.

4.2 Analisa Hasil

Komposisi NA () :

-      Lab lemco powder            1,0

-      Yeast extract                     2,0

-      Pepton                               5,0

-      Sodium chloride                5,0

-      Agar                                  15,0

Komposisi PDA :

-      Potato extract                   4,0 gr

-      Glucose                             20,0 gr

-      Agar                                  15,0 gr

Komposisi media kaldu :

-      Daging                               0,5 kg

-      Aquadest                           1000 ml

-      Pepton                               5 gr

-      Agar                                  7,5 gr

Literatur :

Komposisi NA :

-      Ekstra beef                       10 gr

-      Pepton                               10 gr

-      NaCl                                  5 gr

-      Air destilat             1000 ml

-      Agar                                  15              (Fathir, 2009)

Komposisi PDA :

-      20  ekstra kentang

-        2  glukosa                                         (Fathir, 2009)

Komposisi media kaldu :

-      Daging lembu                    0,5 kg

-      Air                             1 liter

-      Bacto pepton                        5 gram

-      Agar powder                     15 gram           (Fathir, 2009)

Hasil Visualisasi NA, PDA dan media kaldu :

NA dan PDA awalnya berupa serbuk, kaldu awalnya daging yang dipotong kecil – kecil. Setelah dihomogenkan media NA membentuk larutan dan bewarna orange, sedangkan media PDA membentuk larutan dan bewarna bening. Pada daging, daging bewarna agak pucat setelah disimpan selama 24 jam di dalam lemari es. Selanjutnya saat proses sterilisasi, media NA berbentuk cairan bewarna orange agak bening. Media PDA berbentuk cairan bening. Jika didiamkan, media PDA mengental dan membeku. Daging setelah direbus dan disterilisasi, daging semakin bewarna pucat, terdapat endapan pada permukaan media kaldu.

Tingkat kekeruhan tiap sampel :

Pada tabung  dengan sampel berupa 1 gram tanah, tingkat kekeruhannya paling keruh dibandingkan tabung lainnya. Pada , tingkat kekeruhan juga masih tinggi walaupun tidak sekeruh tabung . Kemudian pada tabung , dengan tingkat kekeruhan sedang, larutannya bewarna coklat namun agak bening. Pada tabung , tingkat kekeruhannya sedikit, larutan bewarna bening. Kemudian pada tabung , kekeruhannya paling rendah disbanding tabung – tabung lainnya.

5. KESIMPULAN

·         Media adalah suatu substrat dimana mikroorganisme dapat tumbuh yang disesuaikan dengan lingkungan hidupnya.

·         Pengenceran biasanya menggunakan larutan fosfat buffer, larutan garam 0,9  atau larutan ringer.

·         Secara umum, metode penanaman dapat dibedakan atas dua macam yaitu metode tuang dan metode sebar.

·         Alat – alat yang digunakan antara lain kompor, panci, timbangan, tabung reaksi, autoklaf, cawan petri, Erlenmeyer, rak tabung reaksi, Bunsen, gelas ukur, pipet volume, pipet serologis, incase, timbangan digital. Sedangkan bahan – bahannya adalah daging 0,5 gram, air destilata 1000 ml, kain saring, prpton 5 gr, agar 5 gr, PDA, NA, aquades, sampel, tali, kapas, Koran.

·         Komposisi NA = lab lemco powder, yeast extract, pepton, sodium chloride, agar. Komposisi PDA = potato extract, glucose, agar. Komposisi media kaldu = daging, aquadest, pepton, agar.

·         Hasil visualisasi pada NA dan PDA setelah sterilisasi menjadi lebih bening. NA berwarna orange bening dan PDA menjadi larutan yang bening. Media kaldu setelah sterilisasi berwarna lebih pucat dan terdapat endapan pada permukaan media.

·         Pada pengamatan terhadap tingkat kekeruhan tiap sampel, semakin sedikit konsentrasi sampel pada tiap tabung, semakin muda warnanya dan ssemakin banyak kandungan at pelarutnya dibanding sampel.

DAFTAR PUSTAKA

Dwidjoseputro. 1964. Dasar – dasar Mikrobiologi.  Jakarta : Djambatan

Fais,2009. Metode penanaman. http://faizcute.blogspot.com/ Diakses  pada tanggal 22 November 2010, pukul 14.00 WIB

Fathir, Fuad.2009. Media pertumbuhan mikroba. http://fuadfathir.blogspot.com/  Diakses pada tanggal 22 November 2010, pukul 10.00 WIB

Hadieoetomo, 2010. Media. http://belajarmikro.co.cc/ Diakses pada tanggal      22 November 2010, pukul 14.00 WIB

Nurohaianah et al,  2007.  Media . Jakarta : UI Press.

Pelczar et al,1986.  Dasar – dasar Mikrobiologi . Jakarta : UI Press.

Ratna,2010.  Membuat media pertumbuhan mikroba. http://mikrobiologiku.co.cc/ Diakses pada tanggal 22 November 2010, pukul 10.00 WIB.

Rully,          2009.  http://media-na.com.html/ Diakses pada tanggal 22 November 2010, pukul 14.00 WIB

Tortora, 2010.  Semua tentang Mikrobiologi.  http://tortora.blogspot.com/ Diakses pada tanggal 22 November 2010 pukul 10.00 WIB

Waluyo,2005.  http://waluyoimut.co.cc/  Diakses pada tanggal 22 November 2010, pukul 14.00 WIB

1.    PENDAHULUAN

Pertumbuhan didefinisikan sebagai pertambahan secara teratur semua komponen di dalam sel hidup. Pertumbuhan microorganism terdiri dari beberapa fase yaitu fase adaptasi, pertumbuhan awal, partum,buhan, logaritmik, pertumbuhan lambat, pertumbuhan lambat (stationer), menuju kematian, serta fase kematian. Factor- factor yang mempengaruhi pertumbuhan adalah nutrien, air, pH, suhu dan oksigen.

Suatu sampel yang diperkirakan mngandung lebih dari 300 sel mikroba per ml, per g, atau per cm permukaan, memerlukan perlakuan pngenceran sebelum ditumbuhkan pada medium agar di dalam cawan petri, sehingga setelah inkubasi akam terbentuk koloni pada cawan tersebut dalam jumlah yang dapat dihitung, dimana jumlah yang terbaik adalah 30-300. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu merupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloni dapat di hitung sebagai satu koloni dan suatu dertan (rantai) koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai satu koloni.

Maksud dan Tujuan

            Maksud dari praktikum ini adalah agar praktikan mikrobiologi dasar dapat mengetahui cara-cara perhitungan koloni bakteri sesuai dengan prosedur yang tepat

            Tujuan dari praktikum ini adalah agar praktikan mampu melakukan perhitumgan koloni bakteri sesuai dengan prosedur yang tepat.

2.    Metode

Alat

·         Cawan petri                 : sebagi tempat untuk pembiakan/ pertumbuhan

·         Incase                                     : untuk inkubasi pada suhu kamar 24-27^oc

·         Colony counter           : untuk perhitungan koloni bakteri

Bahan

·         Na                   : untuk pertumbuhan jamur

·         Alcohol 70%    : untuk mensterilkan tangan dan meja

·         Kapas              : untuk menutup tabung reaksi dan Erlenmeyer

·         Koran              : untuk membungkus alat-alat

·         Tali                  : untuk mengikat alat-alat

Cara Kerja

v  Perhitungan koloni baktri

·         Ambil cawan petri yang brisi medium dan sampel dari incase

·         Hitung koloni bakteri dengan colony counter

v  Perhitungan hasil baktri

                            diambil cawan petri yang didalam incase

Hasil

                            dihitung jumlah koloni dengan colony counter

v  Rumus perhitungan bakteri

3.    Tinjauan Pustaka

3.1          Pengertian Pertumbuhan Bakteri

Istilah pertumbuhan umumnya digunakan untuk bakteri atau mikroorganisme lain dan biasanya mngacu pada prubahan didalam hasil panen sel dan bahkan pertumbuhan total individu organisme (Pelczar, 2008).

Pertumbuhan suatu individu khususnya bakteri berarti semua individu kcil menjadi / bertambah besar yang pertama mengankut volume individu (Dwijosepotro, 1964).

Pertumbuhan diartikan sebagai penambahan dan dapat dihubungkan dengan penambahan ukuran, jumlah bobot, massa, dan banyak, parameter lainnyadari suatu bentuk hidup. Penambahan ukuran atau massa suatu sel individu biasanya terjadi pada proses pendewasaan (maturasi) dan perubahan ini pada ummnya bersifat sementara ( tempores) untuk kemudian dilanjutkan dengan proses multiplikasi dari sel tersebut. Multiplikasi terjadi dengan cara pembelahan sel (Irianto, 2006).

3.2          Fase – fase Pertumbuhan Bakteri Dan Kurva pertumbuhan

Menurut Lay (1992) fase-fase pertumbuhan bakteri terdiri atas :

·         Fase Penyesuai diri

Penyesuaian bakteri kesuatu lingkungan baru. Pada fase ini, tidak ada kenaikan jumlah sel, melainkan kenaikan ukuran sel. Peningkatan juga terlihat pada protein sel, DNA, dan metabolism pada fase ini, sel bakteri secara masih muda.

·         Fase Logaritmik

Skema fase ini, jum,lah sel makin meningkat dari 1-2, 2-4, 4-8, dan seterusnya. Jika jumlah sel dibandingkan dengan waktu maka dalam sekala logaritmik akan terjadi gerak lurus. Dari peningkatan secara logaritmik ini, dapat dihitung waktu yang ditentukan bagi pembelahan sel yaitu waktu generasi.

·         Fase stasioner

Pada fase ini kecepatan tumbuh meningkat secara dengan kecepatan mati, jadi jumlah seakan konstan.

·         Fase Kematian

Pada fase ini terjadi akumulasi bahwa toksin zat hara yang diperlukan sel mikroorganisme jumlah berkurang sehingga bakteri masuk ke fase kematian. Skema kurva waktu ini, jum,lah sl, yang mati menunjukan korus garis bil,a diskalakan dengan logaritma, fase ini kebalikan dari fase logaritmik pertumbuhan.

3.3          Faktor – factor yang Mempengaruhi Pertumbuhan Bakteri

Menurut Rachadie (2006) kemampuan m,ikroorganisme untuk tumbuh dan tetap hidup memerlukan suatu hal yang sangat penting untuk diketahui. Pengetahuan tentang factor-faktor yang mempengaruhi adalah sebagai berikut:

·         Susplay nutrisi

·         Suhu / temperature

·         Keasaman / kebasaan (pH)

·         Ketersedian oksigen

Pertumbuhan bakteri pada umumnya akan dipengaruhi oleh factor ini membari gambaran yang menunjukan larutan prtumbuhan (Pratiwi, 2008).

Menurut Irianto (2006) Factor-faktor lingkungan yang menguasai kehidupan bakteri antara lain sebagai berikut:

a.    Suhu adalah suatu factor yang sangat  penting yang mempengaruhi pertumbuhan miltiplikasi dan kelangsungan hidup dari semua organism hidup.

b.    Bahan bentuk gas. Jenis dan konsentrasi gas dalam lingkungan sangat mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme.

c.    Tekanan osmosis. Peristiwa terjadinya plasmolisis dan plasmoptisis disebabkan karena sel berbeda dalam lingkungan dengan osmosis lebih tinggi atau lebih rendah dari isi sel.

d.    Pengeringan. Banyak spsies banyak mengatasi pengeringan total untuk waktu yang lama meskipun mikroorganisme dalam keadaan ini tidak tumbuh.

e.    Keadaan eksrim dingin. Banyak mikroorganisme sangat tahan terhadap keadaan ekstrim dingin meskipun dalam bentuk vegetative.

f.     Efek ion. Suatu factor yang sangan jelas mempengaruhi semua mikroorganisme, brikut juga tiap sel semua tumbuhan dan jaringan hewan  adal kesamaan atau kebebasan cairan yang mengelilinginya.

g.    Efek radiasi. Dibagi menjadi beberapa bagian diantaranya:

ü  Inframerah

ü  Sinar-X

ü  Sinarmatahari

3.4          Macam Metode Perhitungan Koloni

Menurut Lay (1992) macam perhitungan koloni antara lain:

Ø  Jum,lah sel hidup

Pada metode ini, biakan bakteri di encerkan kemudian ditempatkan dalam agar atau filter membrane, jumlah koloni yang tumbuh antara 30-300 satuan yang dipakai dalam perhitungan koloni adalah FU

Ø  Metode Mikroskopik menurut Bread

Dalam prhitungan dgunakan lensa okuler khusus untuk memproleh luas lapangan perhitungan, factor pengncran luas daerah. Pada kaca objek dan luas langan perhitungan m,enentukan factor krockis mikroskop yang diperlukan  dalam prhitungan jumlah sel.

Ø  Metod ruang Hitung

Dapat digunakan wak,tu menghitung sel bakteri atau sel ragi kadang-kadang mati

Ø  Perhitungan Elektonik

Menggunakan kolony counter metode ini berdasarkan pada aliran kondeksi di medium untuk menentukan adanya sel. Suspense dialirkan melalui benang yang kecil.

4.    PEMBAHASAN

4.1          Analisa Prosedur

Dalam praktikum mikrobiologi dasar tentang perhitungan koloni bakteri adalah ,langkah pertama yang harus dilakukan adalah disiapkan alah dan bahan. Alat yang digunakan adalah cawan petri sebagi media atau pertumbuhan, incase sebagai tempat untuk menginkubasi pada suhu kamar dan koloni counter untukn menghitung jumlah koloni bakteri. Sdangkan bahan yang digunakan adalah NA untuk media prtumbuhan bakteri, alcohol 70% sebagai bahan untuk pengkondisian aseptis, kapas, erlenmenyer saat pembuatan media NA, k,oran untuk membungkus cawan petri sebelum di incubasi dalam incase, dan tali sebagai pengikat cawan petri seblum dilakukan inkubasi.

Kemudian disiapkan media NA, la,lu dihitung koloni bakteri dengan cara diambil cawan petri yang terdapat bakteri dari media NA. kemudian dengan menggunakan koloni counter bakteri dihitung. Dengan cara disntuh dengan pulpen pada bagian koloninya, lalu dicatat hasilnya. Setelah bakteri dihitung dengan koloni counter, selanjutnya menghitung total koloni dengan sistematis yaitu

Adapun syarat perhitungan koloni sehingga koloni dapat dihitung yaitu:

·         Jumlah koloni yang akan dihitung harus dapat dihitung bakan berupa TBUD ( ditak bisa untuk dihitung ) atau spreader ( jumlah bakteri melebihi ¼ dari cawan petri ) sehingga tidak bisa dihitung dan jumlanya harus rasional dsalam 1 faktor pengenceran.

·         Jumlah koloni kisaran ratio / dalam kisaran ratio

·         Jumlah koloni antara 30-300

·         Melihat tingkat pengenceran karena semakin tinggi pengencera makin sedikit jumlah mikroba sehingga jumlah koloni dapat dihitung

4.2 Analisa Hasil

      4.2.1 Perhitungan

                          Pada hasil praktikum mikrobiologi dasar tentang perhitungan koloni, didapatkan jumlah hasil koloni yang setelah 24 jam media diinkubasi dalam incase, kemudian diambil dan diamati. Dari 6 cawan petri yang ada, cawan petri 10^-3 lebih banyak terdapat koloni mikroba. Hal ini dikarenakan proses pengenceran sesuai dan tidak terkontaminasi dengan udara luar. Sedangkan pada cawan petri 10^-4 da 10^-5 mikrobanya ada yang sedikit dan ada yang tidak dapat dihitung bahkan melebihi dari seperempat cawan.

                          Dari hasil penanaman dapat diketahui bahwa pada cawan petri 10^-3 A ditumbuhi 209 koloni dan pada cawan C B ditumbuhi 187 koloni. Pada cawan petri 10^-4 Aditumbuhi 85 koloni dan 10^-4 B ditumbuhi 64 koloni. Sedangkan pada cawan petri 10^-5 A ditumbuhi 102 koloni dan 10^-5 B ditumbuhi 132 koloni. Cara perhitungan koloninya, setelah koloni yang ditemukan ditandai dengan spidol. Dihitung dengan rumus

                Total koloni = Σ koloni x

               dengan satuan 10^-5 untuk hasil akhirnya.

                Total koloni = Σ koloni x                

                                    =            

                                    =    198     

                                    = 1,98 x 10^-5

4.2.2 Hasil Perhitungan Dibandingkan dengan Tiap Kelompok

                          Pada praktikum mikrobiologi dasar didapatkan hasil tiap kelompok adalah sebagai berikut :

·      Kelompok 21

(sampel tanah beringin)

F. Pengenceran	A	B
10-3	124	214
10-4	72	64
10-5	50	123

                  

       Total koloni = Σ koloni x

                           =         

                           = 169 x 10^-3                                                             

                           = 1,69 x 10^-5

·         Kelompok 22

(sample tanah lapangan volley)

F. Pengenceran	A	B
10-3	183	107
10-4	213	155
10-5	56	78

      Total koloni = Σ koloni x  

                          =           

                          = 145 x 10^-3                                                                                                    = 1,45 x 10^-5

·         Kelompok 23

(sampel tanah kortim)

F. Pengenceran	A	B
10-3	89	57
10-4	184	105
10-5	32	64

      Total koloni = Σ koloni x  

                           =  

                           = 73 x 10^-3                                                               

                           = 0,73 x 10^-5

·         Kelompok 24

(sampel tanah gazebo)

F. Pengenceran	A	B
10-3	36	33
10-4	350	TBUD
10-5	61	29

      Total koloni = Σ koloni x  

                         =   

                          = 34,5 x 10^-3                                                                                                   = 0,345 x 10^-5

·         Kelompok 25

(sampel tanah himpunan)

F. Pengenceran	A	B
10-3	209	187
10-4	85	64
10-5	102	132

      Total koloni = Σ koloni x  

                        =           

      = 302,5 x 10^-3                                                                       

      = 3,025 x 10^-5

·         Kelompok 26

(sampel tanah)

F. Pengenceran	A	B
10-3	-	-
10-4	-	-
10-5	-	-

Total koloni = Σ koloni x        

                  = 0

·         Kelompok 27

(sampel tanah gazebo)

F. Pengenceran	A	B
10-3	TBUD	TBUD
10-4	86	197
10-5	TBUD	TBUD

      Total koloni = Σ koloni x  

                         =

      = 141,5 x 10^-3                                                                       

      = 14,15 x 10^-5

·         Kelompok 28

(sampel tanah himpunan)

F. Pengenceran	A	B
10-3	TBUD	232
10-4	137	TBUD
10-5	111	TBUD

      Total koloni = Σ koloni x  

                         = 232 x          

      = 232 x 10^-3                                                                                                  

      = 2,32 x 10^-5

 Total koloni = Σ koloni x       

                    = 137 x                     

                   = 137 x 10^-4                                                                                 

                   = 13,7 x 10^-5

Σ koloni       = 2,32 . 10^-5  x 13,7 . 10^-5

  = 16,02 . 10^-5

·         Kelompok 29

(sampel tanah depan BEM lama)

F. Pengenceran	A	B
10-3	284	19
10-4	32	65
10-5	21	20

      Total koloni = Σ koloni x  

      = 284 x 10^-3              

                        = 2,84 x 10^-5

·         Kelompok 30

(sampel tanah depan musholla)

F. Pengenceran	A	B
10-3	44	TBUD
10-4	345	139
10-5	TBUD	TBUD

     

Total koloni = Σ koloni x        

      = 44 x 10^-3    

                  = 0,44 x 10^-5                                                                                                                  Total koloni = Σ koloni x          

 = 139 x 10^-4       

                   = 13,9 x 10^-5

Σ koloni       = 0,44 . 10^-5  x 13,9 . 10^-5

  = 14,34 . 10^-5

·         Kelompok 31

(sampel tanah lapangan volley)

F. Pengenceran	A	B
10-3	TBUD	TBUD
10-4	TBUD	TBUD
10-5	298	291

      Total koloni = Σ koloni x  

      = 0    

·         Kelompok 32

(sampel tanah laboratorium mikro)

F. Pengenceran	A	B
10-3	285	TBUD
10-4	143	TBUD
10-5	TBUD	TBUD

      Total koloni = Σ koloni x  

      = 285 x 10^-3              

      = 2,85 x 10^-5

·         Kelompok 33

(sampel tanah beringin)

F. Pengenceran	A	B
10-3	67	176
10-4	298	128
10-5	38	228

      Total koloni = Σ koloni x  

                         =

      = 121,5 x 10^-3                                                                                   

      = 1,215 x 10^-5

·         Kelompok 34

(sampel tanah beringin)

F. Pengenceran	A	B
10-3	288	293
10-4	TBUD	TBUD
10-5	TBUD	TBUD

      Total koloni = Σ koloni x  

                         =           

      = 290,5 x 10^-3                                                                                                = 2,905 x 10^-5

5.    KESIMPULAN

·         Pertumbuhan diartikan  sebagai penambahn atau dapat dihubungkan dengan penambahan ukuran, jumlah bobot, massa, dan banyak parameter lainnya dari suatu bentuk hidup.

·         Fase-fase pertumbuhan bakteri

-          Fase adaptasi

-          Fase pertumbuhan logaritmik

-          Fase pertumbuhan awal

-          Fase pertumbuhan tetap

-          Fase menuju kematian

-          Fase kematian

·         Factor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri

-          Suhu

-          Bahan bentuk gas

-          Tekanan osmotic

-          Pengeringan

-          Keadaan ektim dingin

-          Efek ion

-          Efek radiasi

·         Rumus perhitungan koloni

·         Syarat perhitungan bakteri

-          Jumlah koloni yang akan dihitung harus dapat dihitung

-          Jumlah koloni antara 30-300

-          Melihat jumlah pengenceran karena semakin tinggi pengnceran maka sedikit jumlah mikroba sehingga jumlah koloni dapat dihitung

·         Kolni bakteri jumlah tertinggi kelompok 24 adalah 239 x 10^-5 dan terendah klompok 23 adalah 0.73 x 10^-5

DAFTAR PUSTAKA

Dwijosaputro, 1964. Dasar –Dasar mikrobiologi.

Irianto, 2006. Mikrobiologi. Yrama widya; Bandung

Lay, 1992. Mikrobiologi. Rajwalivers; Jakarta

Pelczar, 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. UI-Press; Jakarta

Pratiwi, 2008. Mikrobiologi Farmasi. Erlangga; Jakarta

Rachadie, 2006. http://wordpress.com diakses pada tanggal 13 November 2010.   Pikul 15.30 WIB.

                                     

1.    PENDAHULUAN

Diantara tumbuh-tumbuhan rendah (bersahaja), maka golongan ganggang (alga) dan golongan jamur merupakan kelanjutan daripada golongan bakteri. Baik jamur yang bersahaja maupun jamur yang tingkat tinggi, tubuhnya mempunyai cirri yang khas, yaitu berupa benang tunggal yang bercabang-cabang yang disebut misselium atau berupa kumpulan benang-benang yang padat menjadi satu. Hanya golongan ragi (saccharomycetes) itu tubuhnya berupa sel-sel tunggal. Ciri kedua ialah, jamur tidak mempunyai klorofil, sehingga hidupnya terpaksa heterotrof.

Golongan jamur mencakup lebih dari 55.000 species. Jumlah ini jauh melebihi jumlah species bakteri. Tentang klasifikasinya belum ada kesatuan pendapat yang menyeluruh diantara para sarjana taksonomi. Bakteri dan jamur merupakan golongan tumbuh-tumbuhan yang tubuhnya tidak mempunyai diferensiasi, oleh karena itu disebut tumbuhan talus (thallophyta), lengkapnya thallophyta yang tidak berklorofil.

Klasifikasi jamur

Menurut ALEXCOUPOULUS (1962) thallophyta yang tidak berklorofil dibagi atas:

1.    Phylum Schizomycophyta (Bakteri)

2.    Phylum Mxyomycophyta (Jamur lendir)

3.    Phylum Eumycophyta (Jamur benang)

Phylum Eumycophyta terbagi atas 4 kelas, yaitu :

1.    Klas Phychomycetes

2.    Klas Aschomycetes

3.    Klas Deuteromycetes atau fungi imperfecti (jamur tak sempurna)

4.    Klas Basidiomycetes

Maksud dan tujuan

Maksud dari praktikum ini adalah agar praktikan dapat mengetahui dan memahami cara mengidentifikasi jamur dengan media PDA.

Sedangkan tujuan dari praktikum ini adalah agar praktikan terampil dalam melakukan ppembuatan media, pengenceran dan penanaman jamur serta identifikasinya.

2.    METODE

2.1.        Alat

Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

·         Tabung reaksi         : untuk melakukan pengenceran bertingkat.

·         Cawan Petri            : tempat / media penanaman

·         Erlenmeyer             : tempat larutan sementara saat sterilisasi

·         Rak tabung reaksi  : tempat tabung reaksi

·         Bunsen                   : pengkondisian aseptis

·         Gelas ukur              : menakar larutan sejumlah 50, 100, 250 ml.

·         Pipet volume          : mengambil larutan dengan skala (1-10 ml).

·         Autoklaf                  : sterilisasi basah.

·         Inchase                  : inkubasi pada suhu kamar (24o-27oC)

·         Tali                         : mengkikat alat-alat.

·         Koran                     : membungkus peralatan.

·         Timbangan analitik: menimbang bahan yang akan digunakan.

·         Sprayer                 : tempat alcohol 70%.

·         Mikroskop             : untuk benda-benda berukuran mikroskopik.

2.3    Bahan

Adapun bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah :

·         PDA            : media penanaman.

·         Aquades     : pelarut media.

·         Sampel       : sebagai sumber yang diamati

·         Na Fisiologis : untuk pengenceran.

·         Koran            : membungkus peralatan.

·         Kapas           : menyumbat pangkal pipet serologis saat streilisasi.

·         Alkohol 70% : pengkondisian aseptis.

·         Tali               : mengikat peralatan

2.3 Skema Kerja Identifikasi Jamur

                                                                                                                  

3.    TINJAUAN PUSTAKA

3.1.        Pengertian Jamur

Fungi atau jamur merupakan organism eukariotik yang mempunyai ciri mempunyai spora, memproduksi spora, tidak punya klorofil, dapat berkembangbiak secara seksual dan aseksual (Waluyo, 2004).

Fungi merupakan decomposer/ organisme pembusukan yang utama pada bagian tanaman yang juga dapat dimanfaatkan misalkan pada makanan (Tortora, 2007).

Fungi adalah organisme heterotrofik memerlukan senyawa organik untuk nutrisinya (Pelczar et al, 1986).

3.2.        Jelaskan macam-macam klasifikasi jamur

1.    Zygomicotina, karena membentuk spora istirahat yng berdinding tebal yang disebut Zygospora.

2.    Ascomycotina, bercirikan talus yang terdiri dari miselium bersepta.

3.    Pyrenomycetes, askoskarp berbentuk khusus yang dilengkapi ostiolum.

4.    Deuteromycotina, fungi imperfecti karena belum diketahui adanya reproduksi seksual, hefaseptat, atau uniseluler.

5.    Mycophycphyta, liken atau lumut kerak biasanya dianggap sebagai kelompok khusus walaupun dasarnya merupakan asosiasi simbiosis antara jamur mikrobion dan gangguan tikobion (Mahyudin, 2009).

3.3.        Macam-macam metode penanaman jamur beserta kelebihan dan kekurangannya

Menurut Dwijoseputro (1964), metode penanaman jamur ada 4 macam yaitu:

1.    Spora biasa yang terjadi karena protoplasma dalam satu sel tertentu berkelompok kecil.

2.    Konidiospora: spora yang terjadi karena ujung suatu hifa berbelah-belah seperti tasbih.

3.    Pada beberapa spesies bagian-bagian miselium dapat membesar serta berdinding tebal.

4.    Jika bagian miselium itu tidak lebih besar daripada aslinya maka bagian ini disebut spora.

 

4.  PEMBAHASAN

      4.1.      Analisa Prosedur

Prosedur identifikasi jamur serta tujuan tiap perlakuan adalah diawali dengan penanaman jamur pada cawan petri. Pada penanaman ini dilakukan metode tuang dimana sampel diletakkan terlebih dahulu pada cawan kemudian dimasukkan media PDA. Diletakkan sampel sebanyak  1 ml.

Didalam cawan petri yang dibuka setengah dan didekatkan dengan api Bunsen untuk pengkondisian aseptis. Dengan cara yang sama, dimasukkan media PDA 15-20 ml. Media ditunggu hingga dingin lalu dibalik untuk menghindari terjadinya spreader. Cawan yang berisi jamur dibungkus koran dan diikat, cawan petri diinkubasi dalam incase selama 24 jam.

Kemudian cawan petri berisi jamur tersebut diambil dari incase dan diinokulasi dengan 2 cara untuk perbedaan dalam identifikasi jamur. Cara pertama, jamur diletakkan pada coverglass dan ditetesi NaFis 0,9% agar jamur lebih mudah diamati jika ditetesi NaFis 0,9%.Kemudian coverglass dibalik dan diletakkan diatas objekglass cekung ini merupakan pengamatan dengan cara tetesan bergantung. Jamur diamati dibawah mikroskop. Difoto dan digambar hasil pengamatan jamur.

Cara kedua adalah dimasukkan inokulasi jamur dalam NaFis 0,9% steril dan diinkubasi semalam dalam incase. Pelakuan ini untuk perbedaan perlakuan antara yang telah diamati dengan yang diamati setelah semalam. Setelah diinkubasi semalam dalam incase, diinokulasi dengan jarum loop dan diletakkan dalam coverglass dan ditetesi NaFis 0,9% steril. Coverglass dibalik dan diletakkan di atas objekglass cekung sehingga ini merupakan pengamatan dengan cara tetesan bergantung. Jamur daiamati dibawah mikroskop, difoto dan digambar hasil pengamatan jamur.

4.2  Analisa Hasil

4.2.1  Hasil Identifikasi Jamur

Pada praktikum mikrobiologi dasar materi identifikasi jamur. Hasil-hasil dari proses penghomogenan Na Fis dengan sampel. Setelah diamati dibawah mikroskop, diapatkan jamur pada kaca objek membantu seperti tabung-tabung panjang tanpa sekat yang menumpuk-numpuk yang berwarna untuk dinding selnya. Hal ini disebabkan karena terjadi penebalan pada dinding sel.

Akan tetapi hasil identifikasi jamur yang sebelum diinokulasi dengan Na Fis, jamur bebrbentuk seperti batang lurus dan tidak berkoloni. Hal ini disebabkan karena media pembiakannya hanya dibantu dengan PDA. Sehingga mikroba hanya nampak sedikit dan samar-samar, sedangkan gambar yang sesudah diinokulasi dengan Na Fis dapat dilihat koloni yang nampak jelas bagian-bagianya yang tidak bersekat dan berinti banyak. Hal ini disebabkan karena pada media, diinokulasi dengan jarum loop, lalu media dicampur dengan Na Fis, dimana Na Fis ini berfungsi untuk membantu proses pembiakan jamur.

4.2.2 Gambar Hasil Pengamatan dan Literatur

Pada praktikum mikrobiologi dasar materi Identifikasi jamur didapatkan hasil gambar jamur yang telah diinokulasi dengan NaFis

                              Foto Jamur                                           Gambar Literatur

                             Gambar Literatur

5.  KESIMPULAN

·         Ciri-ciri jamur antara lain adalah tubuhnya berupa benang tunggal bercabang-cabang yang disebut miselium atau berupa kumpulan benang padat. Hanya golongan ragi yang tubuhnya berupa sel-sel tunggal. Jamur tidak berklorofil sehingga hidupnya heterotrof.

·         Thallophyta tidak berklorofil dibagi atas Schizomycophyta, Mycomychophta, Eumychophyta dimana Eumychophyta dibagi atas Phycomycetes, Asomycetes, Deuteromycetes dan Basidiomycetes.

·         Setelah diinkubasi semalam, dalam pengamatan mikroskop, jamur tampak lebih banyak dan semakin melebar koloninya.

·         Bakteri dan jamur merupakan tumbuh-tumbuhan yang tubuhnya tidak memiliki diferensiasi, sehingga disebut tumbuhan tallus.

·         Media penanaman jamur yaitu PDA.

DAFAR PUSTAKA

Dwijoseputro. 1964. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan

Google Images. 2010. Fungi pic. http:// Google Images.com.                                  Diakses pada tanggal 20 November 2010, pukul 13.00 wib.

Mahyudin. 2009. Jamur. http:// Mikro.co.cc.                                                              Diakses pada tanggal 15 November 2010, pukul 16.00 wib.

Pelczar et al. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: UI Press

Tortora. 2007. Semua tentang mikrobiologi. http:// Tortora.blogspot.com.                            Diakses pada tanggal 20 November 2010, pukul 14.00 wib.

Waluyo. 2004. Microbiology and science. http:// WaluyoMikrobiologi.blogspot.com.                      Diakses pada tanggal 20 November 2010, pukul 17.30 wib.

       

1.    PENDAHULUAN

            Bakteri Vibrio sp termasuk bakteri yang heterogen dan gram negative. Bakteri vibrio merupakan bakteri penghuni tambak yang terdapat di terdapat di pantai-pantai. Jenis bakteri ini merupakan kelompok bakteri yang banyak terdapat di perairan laut dan payau. Ada 2 bakteri penting yang diketahui menyerang ikan laut yaitu  : Vibrio alginolyticuc dan Vibrio parahaemolyticus. Vibrio sp mempunyai sifat gram negative, sel tunggal berbentuk batang pendek yang bengkok (koma) atau lurus, berukuran panjang (1,4 – 5,0) mikro m dan lebar (0,3 – 1,3) mikro m dan mempunyai flagella polar.

            Vibriosis merupakan penyakit yang disebabkan oeh vibrio sp. Vibriosis merupakan penyakit sekunder, artinya penyakit ini muncul setelah adanya serangan penyakit yang lain misalnya protozoa atau penyakit lainnya. Pada dasarnya penyakit ini tidak begitu berbahaya, tetapi yang menjadikan bahaya justru infeksi sekunder jenis bakteri lain yang dapat memperparah penyakit tersebut dan menyebabkan kematian ikan.

            Media yang sering digunakan dalam pengujian bakteri vibrio antara lain TCBC (Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar), TSI atau LIM. Kultur yang akan diuji diinokulasi pada permukaan cawan dan setelah inkubasi selama 24 jam pada suhu 27ᵒ C dilihat adanya pertumbuhan yang ditunjukkan oleh terbentuknya areal bening disekeliling koloni.

Maksud dan Tujuan

            Maksud dari praktikum ini adalah agar praktikan dapat mengetahui cara pengujian dan perhitungan jenis bakteri vibrio.

            Tujuan dari praktikum ini adalah agar praktikan dapat melakukan pengujian total bakteri vibrio dengan metode yang tepat

                                                          2. METODE

2.1 Alat

·         Cawan petri                 : Tempat penanaman.

·         Pipet serologis             : Mengambil larutan dengan skala (0,1-1 ml).

·         Tabung Reaksi            : Untuk pengenceran bertingkat.

·         Rak tabung reaksi       : Tempat tabung reaksi.

·         Incase                         : Menginkubasi suhu kamar (24º C-27º C).

·         Panci                           : Merebus erlanmayer berisi media yang akan digunakan.

·         Kompor gas                : Sumber panas untuk perebusan.

·         Erlanmayer                 : Tempat larutan sementara saat sterilisasi.

·         Timbangan digital        : Menimbang bahan yang digunakan dengan ketelitian

·         Bunsen                        : Pengkondisian aseptis

2.2 Bahan

·         Air Laut                        : Sumber bakteri vibrio.

·         TCBS                          : Media penanaman vibrio.

·         NaFis 0,9℅                 : Untuk pengenceran.

·         Alkohol 70℅                : Pengkondisian aseptis.

·         Tissue                          : Mengeringkan alat-alat.

·         Aquades                      : Pelarut dan digunakan saat pengenceran.

·         Kapas                          : Menyumbat mulut erlanmayer.

·         Kertas label                 : Menandai perlakuan berbeda pada tabung reaksi dan cawan petri.

·         Koran                          : Membungkus peralatan.

·         Tali                              : Mengikat peralatan.

·          

a.    Penanaman Vibrio

·   Diambil 1 ml

·   Dimasukkan dalam tabung reaksi yang berisi Na Fis dan dicatat sebagai 10^-1

·   Dilakukan pengenceran sampai 10^-3

·   Dilakukan penanaman duplo dari pengenceran 10^-1 sampai 10^-3

·   Dituang media TCBS + 20 ml di tiap cawan

·   Ditunggu dingin

·   Dibalik

·   Dibungkus koran

·   Diikat dengan tali

·  

Hasil

Diinkubasi dalam incase selama 24 jam

b.   

TCBS

Pembuatan TCBS

·      Ditimbang sebanyak 10,56 gram

·      Dimasukkan dalam Erlenmeyer 250 ml

·      Ditambahkan aquades 120 ml

·      Diberi kapas

·      Dibungkus koran

·      Diikat dengan tali

·      Direbus dalam panci

·     

Hasil

Disimpan dalam water bath sampai dengan media digunakan untuk penanaman

3. TINJAUAN PUSTAKA

3.1 Pengerian Bakteri Vibrio

           Bakteri berasal dari bahasa latin bacterium (jamak:bacteria) adalah kelompok vaksasadan original dari organism hidup , berukuran sangat kecil (mikroskopik) dan kebanyakan uniseluler (bersel tunggal) dengan struktur sel yang velatif sederhana tanpa nucleus dan organel lain seperti mitokondria dan kloroplas.Bakteri adalah yang paling berlimpah dari semua organism.(Djoelistea ,2010).

           Vibrio merupakan patogen oportunistik yang dalam keadaan normal ada dalam lingkungan pemeliharaan , kemudian berkembang dari sifat yang saprofik menjadi patogenik jika kondisi lingkunganya memungkinkan .Bakteri vibrio yang patogen dapat hidup di bagian tubuh organisme maupun didalam dengan jalan menempel (Feliatra ,1999).

3.2 Jenis-jenis dan Komposisi Media Untuk Pertumbuhan Bakteri Vibrio

           Jenis bakterinya yaitu genus vibrio. Media yang akan digunakan yaitu menggunakan medium selektip Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar, air laut steril ,MR-VP broth , dimethyl-p-fenilen,diamine-okolate,trypticase say broth (TSB), Triple sugar Iron (TSI) agar , L-lysine dihidro chloride ,Nacl , bacteriologycal agar (Reliatra ,1999).  

3.3 Macam-macam Bakteri Vibrio beserta penjelasanya

           Jenis bakteri vibrio yang bersifat pada ikan dan invertebrata laut yaitu vibrio algynoliteus , vibrio charchartae, vibrio salmoniada, vibrio vulnifeus ,vibrio parahaemolitycus, vibrio pelogia ,vibrio splendid ,vibrio fischerin,dan vibrio harvery (Austin ,1993).

           Bakteri Vibrio terdiri dari: Vibrio Angularium ,vibrio Alginolyticus ,vibrio cholera ,vibrio salmonicida ,vibrio vulnificus dan vibrio parahaemolitycus (Feliatra,1999).

3.4 Habitat Bakteri Vibrio dan Mekanisme Penularan Penyakit yang Disebabkan Bakteri Vibrio

           Vibrio yang dalam keadaan normal ada dalam linkungan pemeliharaan , kemudian berkembang dari sifat yang sapofitik menjadi patogenik jika kondisi lingkungan memungkinkan. Terdapatnya bakteri patogen diperairan pantai menandakan adanya kontak dengan buangan limbah industry dan rumah tangga ,dimana bakteri tersebut secara langsung akan tumbuh dan berkembang bila kondisi perairan memungkinkan bakteri dari spesies vibrio secara langsung akan menimbulkan penyakit (pathogen) yang dapat menyebabkan kematian biota seperti ikan yang akan dikonsumsi manusia  sehingga menyebabkan penyakit pada manusia (Feliatra,1999).

4. PEMBAHASAN

4.1 Analisa Prosedur

           Pembuatan media TCBS agar adalah pertama ditimbang TCBS sebanyak 10,56 gram dimana rumus perhitungan x (€cawan)x 20 ml. Jadi  perhitungan x 6x20=10,56 gram TCBS.Dimasukkan dalam erlanmayer 250 ml untuk menghomogenkan dan sebagai wadah media TCBS. Ditambahkan aquadest 20 ml. Ditutup kapas pada ujung bibir erlanmayer untuk penutup erlanmayer saat direbus dan diinkubasi. Erlanmayer dibungkus Koran dan diikat dengan tali untuk pengemasan saat perebusan dan diinkubasi.Erlanmayer direbus dalam panic untuk pensterilan selam 20 menit. Kemudian TCBS diinkubasi dalam waterbath hingga media akan digunakan. TCBS tidak disterilisasi dalam autoklaf karna TCBS memiliki antinutrisi yang dapat merusak nutrisi jika TCBS disterilisasi dalam autoklaf.

Pengenceran

           Pertama disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.Bahan yang digunakan berupa ar laut.Air laut diambil sebanyak 1 ml menggunakan pipet serologis ,kemudian dimaskukkan dalam tabung reaksi 1 yang telah berisi NaFis 0,9 ℅.Kemudian tabung reaksi tersebut dicatat sebagai  dengan member label pada dinding tabung reaksi mengunakan kertas label. Kemudian dari tabung reaksi 1 diambil sebanyak 1 ml menggunakan pipet serologis dipindahkan ke tabung reaksi 2 dan dicatat sebagai  menggunakan kertas label.Kemudian dari tabung reaksi 2 diambil lagi 1 ml dipindahkan ke tabung reaksi 3.Kemudian dicatat sebagai  menggunakan kertas label.

Penanaman Bakteri Vibrio

           Disiapkan alat dan bahan.Bahan yang digunakan adalah sampel air laut.Diambil 1 ml air laut dengan menggunakan pipet serologis dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi nerisi NaFis 0,9℅,dicatat  mnggunakan kertas label.Kemudian dari tabung reaksi diambil 1 ml kemudian dimasukkan kedalam tabung reaksi 2.Dan dicatat sebagai  ,Dari tabung reaksi  , diambil  ml kemudian dimasukkan tabung reaksi 3 dan dicatat . Dilakukan penanaman bakteri vibrio secara duplo sehingga disiapkan 6 cawan petri dengan label ,,,,,.Penanaman bakteri vibrio menggunakan metode tuang yaitu sempel diteteskan dahulu pada cawan petri kemudian media dituangkan didalamnya.Masing-masing sampel air laut diteteskan ke dalam cawan petri 1 ml ke dalam masing-masing cawan yang sesuai dengan label.Kemudian media TCBS dituang pula kira-kira 20 ml(diasumsikan telah menutup seluruh prmukaan sampel).Penuangan media dan sampel dengan cara dibuka cawan petri setengah saja dan diletakkan Bunsen.Perlakuan tersebut untuk mencegah kontraminasi dan pengkondisian aseptis.Cawan petri digoyang-goyang angka 8 agar homogeny dan ditunggu hingga dingin.Setelah dingin ,cawan petri dibalik untuk menghindari uap air yang terjadi saat sterilisasi basah.Kemudian cawan petri dibungkus dengan kertas Koran karna kertas Koran adalah penyerap air yang baik dan merupakan kertas yang mudah didapat.Cawan disusun tiga dan dibungkus Koran.Diikat tali agar cawan tidak bergeser,Cawan dimasukkan dalam incase selam 24 jam,didapat hasil.     

4.2 Analisa Hasil

           Berdasarkan praktikum mikrobiologi dasar tentang perhitungan total vibrio didapat hasil sebagai berikut:

           Hasil gambar dan pengenceran ,,

Pengenceran ,                             Pengenceran ,                Pengenceran

Data pengamatan koloni bakteri vibrio sp.

Kelompok	10-1		10-2		10-3
	A	B	A	B	A	B
21	3	2	0	0	1	0
22	0	16	Sprider	0	0	0
23	0	Sprider	2	0	0	0
24	1	5	1	7	4	0
25	sprider	1	0	0	0	0

5. KESIMPULAN

·         Bakteri vibrio sp menyebabkan penyakit vibriosis.Bakteri vibrio sp merupakan kelompok bakteri yang banyak terdapat pada air laut dan air payau.

·         Media yang sering digunakan dalam pengujian bakteri vibrio antara lain TCBS (Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar),TSI, atau LIM.

·         Adapun alat dan bahan yang dibutuhkan dalam praktikum perhitungan total vibrio adalah Cawan petri, Pipet serologis          Tabung Reaksi,Rak tabung reaksi,Incase,Panci,Kompor gas,Erlanmayer,Timbangan digital ,Bunsen,Air Laut,TCBS,Tali,Alkohol 70℅,Tissue,Aquades,Kapas,Kertas label,Koran,NaFis 0,9℅ 

·         Dari pengamatan terhadap vibrio,dapat disimpulkan bahwa semakin encer atau semakin sedikit konsenrasi pada sampel yang diamati,semakin sedikit pula vibrio yang tumbuh pada media.

DAFTAR PUSTAKA

(3 INDONESIA,2 INGGRIS , 2 JURNAL)

Austin,1993. Vibrio.London :Gram-hill College.

Djoelistia,2010. Belajar bakteri .Http://Djoeltingkung.blogspot.com.Diakses pada 10 november 2010 pukul 14.30 WIB.

Feliatra, 1999.Penyakit yang disebabkan oleh bakteri.Http://Kambing,ui,ac.id.Diakses pada tanggal 10 november pukul 15.00 WIB.

Google Images,2010.Vibrio.Http:// Google Images.com.Diakses pada tanggal 10 november 2010.pukul 14.00 WIB.

Realitra,1999.Jenis-jenis bakteri.Http:Realitra.co.id.Diakses pada tanggal 10 november 2010 pukul 16.00 WIB.